Javascript je trenutno onemogućen u vašem pregledniku.Neke značajke ove web stranice neće raditi ako je JavaScript onemogućen.
Registrirajte se sa svojim specifičnim podacima i određenim lijekom koji vas zanima, a mi ćemo spojiti informacije koje ste dali s člancima u našoj opsežnoj bazi podataka i odmah vam poslati PDF kopiju e-poštom.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Odjel za infektivne bolesti, Prva pridružena bolnica Sveučilišta Suzhou, grad Suzhou, provincija Jiangsu, 215000 Tel.tumora probavnog sustava s 5-godišnjim ukupnim preživljenjem od 14,1%.Mnogim se pacijentima s HCC-om dijagnosticira u uznapredovalom stadiju, stoga je rani probir neophodan za smanjenje smrtnosti od HCC-a.Uz uobičajeno korištene pokazatelje detekcije kao što su alfa-fetoprotein u serumu (AFP), alfa-fetoprotein koji reaguje na lektin (AFP-L3) i abnormalni protrombin (protein II izazvan nedostatkom vitamina K, PIVKA-II), tehnike biopsije tekućine Pokazalo se da ima dijagnostičku vrijednost u otkrivanju HCC-a.U usporedbi s invazivnim postupcima, tekućinska biopsija može otkriti cirkulirajuće maligne metabolite.Tehnike tekućinske biopsije otkrivaju cirkulirajuće tumorske stanice, cirkulirajuću tumorsku DNA, cirkulirajuću RNA i egzosome te se koriste za rani probir, dijagnozu i prognostičku procjenu HCC-a.Ovaj članak daje pregled molekularne biologije i primjene različitih tehnika tekućinske biopsije za izolaciju obećavajućih biomarkera koji mogu biti održive opcije za ranu procjenu HCC-a kako bi se poboljšao rani probir visokorizičnih skupina HCC-a.Ključne riječi: tehnika tekućinske biopsije, hepatocelularni karcinom, visokorizična skupina.
Hepatocelularni karcinom (HCC) čest je zloćudni tumor probavnog trakta, šesti je među novim slučajevima zloćudnih tumora i kod muškaraca i kod žena.1 Diljem svijeta, rak jetre je treći vodeći uzrok smrti od raka nakon raka pluća i kolorektalnog karcinoma, čineći 8,3% smrti povezanih s rakom od svih malignih neoplazmi.1 Prognoza HCC-a usko je povezana sa stadijem u trenutku dijagnoze.Glavni razlozi lošeg preživljenja u HCC-u su intrahepatalne metastaze, trombi portalnog venskog tumora i udaljene metastaze koje onemogućuju resekciju, a mnoge od ovih karakteristika već su prisutne u bolesnika u vrijeme dijagnoze.
Na temelju smjernica za dijagnostiku i liječenje, glavni čimbenici rizika za razvoj HCC-a su ciroza jetre, kronična infekcija virusom hepatitisa B (HBV) ili virusom hepatitisa C (HCV), alkoholna masna bolest jetre i nealkoholna masna bolest jetre (NAFLD). ).2 Osim toga, čimbenici rizika za HCC uključuju unos hrane kontaminirane aflatoksinom, shistosomijazu, druge uzroke ciroze, obiteljsku povijest raka jetre, dijabetes, pretilost, pušenje i ozljedu jetre izazvanu lijekovima.Rizične skupine od 35 i 45 godina trebale bi redovito odlaziti na liječničke kontrole.Rani probir važna je strategija ranog liječenja za poboljšanje ukupnog preživljenja bolesnika s HCC-om.
Biomarkeri kao što su AFP, AFP-L3 i PIVKA-II preporučuju se za rani probir HCC3,4.Tehnike tekuće biopsije pokazale su obećavajuće rezultate u ranoj dijagnozi i procjeni liječenja.5,6 Postignut je značajan napredak u tekućoj biopsiji HCC-a, koja može imati veću osjetljivost i specifičnost od uobičajeno korištenih serumskih markera kao što je AFP (Tablica 1).
AFP je široko korišten biomarker u HCC-u i trenutno je najdetaljniji biomarker koji se naširoko koristi za rani probir, dijagnozu i evaluaciju bolesti.Trajno povišena razina AFP-a smatra se čimbenikom rizika za progresiju HCC-a.7,8 Stopa otkrivanja malog hepatocelularnog karcinoma (sHCC) raste s razvojem ultrazvuka i kompjutorizirane tomografije, a utvrđeno je da je AFP posebno neosjetljiv na otkrivanje hHCC u kliničkoj praksi.Prema retrospektivnoj multicentričnoj studiji9, pozitivan AFP nađen je u 46% (616/1338) slučajeva HCC-a i 23,4% (150/641) slučajeva sHCC-a.Osim toga, razine AFP-a su povišene u bolesnika s kroničnom bolešću jetre i cirozom.10 Dakle, AFP ima ograničen učinak probira za sHCC.11 Prema smjernicama azijsko-pacifičke kliničke prakse za hepatocelularni karcinom, uporaba AFP-a se ne preporučuje.12 Klinički dokazi upućuju na to da je PIVKA-II superiornija od AFP-a u liječenju HCC-a te da kombinacija PIVKA-II i AFP-a ima veću dijagnostičku vrijednost kod HCC-a.13 U usporedbi s biopsijom tkiva, tekućinska biopsija prvenstveno otkriva metabolite povezane s tumorom u tjelesnim tekućinama (krv, slina, pleuralna tekućina, cerebrospinalna tekućina ili urin) i manje je invazivna za tkiva.14 Osim toga, tekuće biopsije mogu odražavati maligne značajke koje nisu prisutne u tkivu primarnog tumora.15 Tekuće biopsije još nisu testirane u kliničkoj praksi za sve vrste tumora, ali njihov dijagnostički potencijal kod raka privlači pozornost onkologa.16 Biopsija tekućine može otkriti cirkulirajuće tumorske stanice (CTCs), cirkulirajuću tumorsku DNA (cDNA), cirkulirajuću slobodnu RNA (ecRNA) i egzosome.U ovom ćemo članku raspravljati o karakteristikama, ulozi i primjeni različitih tehnika tekućinske biopsije u ranom probiru visokorizičnih skupina HCC-a.
Izvanstaničnu DNA (cfDNA) u uzorcima krvi zdravih osoba prvi su opisali 1948. Mandel i sur.17 cfDNA je fragment DNA bez stanica duljine približno 160-180 bp, a potječe prvenstveno iz limfocita i mijeloidnih stanica.ctDNA je specifični mutirani fragment DNA kojeg tumorske stanice oslobađaju u perifernu krv, a koji predstavlja genomsku informaciju tumorskih stanica nakon određenih patofizioloških procesa, uključujući nekrozu, apoptozu i izlučivanje.Udio ctDNA u ukupnoj cfDNA uvelike varira s tipom tumora, a navodi se da su fragmenti cDNA obično manji od 167 bp.18 Underhillova studija pokazala je da su fragmenti cfDNA općenito kraći od normalne cfDNA.19 U usporedbi sa zdravim osobama, ukupna duljina fragmenata cfDNA u krvi pacijenata oboljelih od raka je kraća, pa se cfDNA može koristiti kao pokazatelj ranog probira tumora.Obogaćivanje određenih podskupova duljina fragmenata cfDNA može poboljšati detekciju cDNA povezane s nemetastatskim solidnim tumorima.Studije su pokazale da se ctDNA nalazi u više od 75% uznapredovalih karcinoma gušterače, debelog crijeva, mjehura, gastrointestinalnog trakta, jetre, jajnika, dojke, melanoma te glave i vrata.20,21 Međutim, količina ctDNA u krvi ovisi o mjestu tumora.22 U studiji koju je proveo Bettegoud, utvrđeno je da pacijenti s rakom debelog crijeva, dojke, jetre, pluća i prostate imaju više razine cDNA u krvi od drugih vrsta raka.Nasuprot tome, u bolesnika s rakom usne šupljine, rakom gušterače, rakom želuca i gliomom koncentracija cDNA u krvi bila je niža.dvadeset i jedan
Budući da ctDNA sadrži iste genetske mutacije kao primarne tumorske stanice, cDNA se može koristiti za otkrivanje heterogenih mutacija specifičnih za tumor i epigenetičkih promjena, uključujući metilaciju, hidroksimetilaciju, varijacije pojedinačnih nukleotida i varijacije broja kopija.dvadeset tri
Metilacija DNA jedna je od najčešćih epigenetskih promjena koja rezultira potiskivanjem gena.U usporedbi s normalnim stanicama, postoje razlike u ukupnoj razini metilacije genoma tumorskih stanica, posebno u metilaciji tumor supresorskih gena, koji se mogu otkriti u ranoj fazi, što sugerira da promjene u metilaciji DNA mogu biti pokazatelj ranog otkrivanje tumorigeneze.Tumor supresorski geni povezani s HCC mogu se inaktivirati metilacijom promotora, čime se stimulira tumorigeneza.24 DNK metilacija je idealan marker za ranu dijagnozu tumora zbog svoje tkivne specifičnosti, detektibilnosti i neovisnosti o dobi.Osim toga, metilacija DNA je češća u usporedbi sa somatskim mutacijama jer postoji više ciljnih regija i nekoliko promijenjenih CpG mjesta u svakoj regiji ciljnog genoma.25 Uz višestruka CpG mjesta, velik broj neovisnih hipermetiliranih lokusa u ctDNA identificiran je u DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 i RGS10.26 Xu et al.Usporedbom uzoraka cfDNA od 1098 pacijenata s HCC-om i 835 zdravih kontrola utvrđeno je da geni povezani s HCC-om snažno koreliraju s odgovarajućim potpisima metilacije cDNA plazme.25 Na temelju laboratorijske analize razvijen je prediktivni model koji sadrži 10 markera metilacije s osjetljivošću i specifičnošću od 85,7% odnosno 94,3%, a ti su markeri bili u visokoj korelaciji s masom tumora, stadijem tumora i odgovorom na liječenje.Ovi rezultati pokazuju da upotreba markera metilacije cDNA obećava u dijagnostici, praćenju i prognozi HCC-a.U modelu metilacije koji se sastoji od tri aberantno metilirana gena (APC, COX2, RASSF1A) i jedne miRNA (miR203) koji su predstavili Lu et al27, osjetljivost i specifičnost modela 27 za dijagnosticiranje HCC-a povezanog s HBV-om bile su usporedive.80%.Osim toga, model je mogao detektirati 75% nedijagnosticiranog HCC bolesnika s razinom AFP od 20 ng/mL.Gen za Ras-pridruženu domenu proteina obitelji 1A (RASSF1A) glavni je ponavljajući slijed DNA u ljudskom genomu.Araujo i sur.zaključili su da bi hipermetilacija promotora RASSF1A mogla biti vrijedan biomarker za rani probir HCC-a i potencijalna molekularna meta za epigenetsku terapiju.28 U jednoj studiji, hipermetilacija promotora RASSF1A u serumu nađena je u 73,3% bolesnika s HCC-om.29 Dugo isprepleteni nukleotidni element 1 (LINE-1) još je jedan vrlo aktivan posrednik retrotranspozicije.Hipometilacija LINE-1 nađena je u DNA 66,7% uzoraka seruma HCC-a i bila je povezana s ranim recidivom i lošim preživljavanjem nakon radikalne resekcije.29 Hipermetilacija je uobičajeni genetski proces koji ima jedinstvenu ulogu u razvoju ciroze jetre i HCC-a.30 Nasuprot tome, hidroksimetilacija je proces demetilacije koji inducira reaktivaciju i ekspresiju gena, a detekcija produkta 5-hidroksimetilcitozina (5-hmC) u ovom procesu može se koristiti za identifikaciju tumora.Metilacija i hidroksimetilacija cDNA povezane su s tumorigenezom i mogu pridonijeti ranom otkrivanju HCC-a.U studiji na 2554 ispitanika, 31 5-hmCs na cijelom genomu pronađen je u uzorcima cfDNA, a 32 gena identificirana su usporedbom sekvenci 5-hmC u bolesnika s HCC-om i visokorizičnih skupina poput onih s kroničnim bolestima.Dijagnostički modeli bolesti jetre.i ciroza.Ovaj je model bio superiorniji od AFP-a u razlikovanju HCC od netumorskog tkiva.
Mutacije u kodirajućim regijama mogu dovesti do transkripcijskih abnormalnosti, što može dovesti do promjena u sekvencama proteina i na kraju do raka.Jednonukleotidne varijante su važni genomski markeri za rani probir tumora zbog njihove visoke tkivne pouzdanosti i visoke tumorske i tkivne specifičnosti.Brojne studije povezane s HCC-om koje koriste sekvenciranje sljedeće generacije (NGS) za sekvenciranje egzoma i cijelog genoma raka identificirale su uobičajene mutirane stanične gene kao što su TP53 i CTNNB1, kao i nekoliko uključujući ARID1A, MLL, IRF2.Novi geni, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 i JAK1 pokazuju umjerene stope mutacije. Analiza funkcije mutantnog gena sugerira da su promjene u remodeliranju kromatina, Wnt/β-kateninu i JAK/STAT transdukciji signala, putu staničnog ciklusa P53, epigenetskim modifikatorima, putevima oksidativnog stresa, putu PI3K/AKT/MTOR i RAS/RAF/ Put MAPK kinaze igra ključnu ulogu u onkogenezi HCC-a.32,33 U studiji u kojoj su otkrivene mutacije povezane s tumorom, Huang i suradnici otkrili su da je učestalost mutacija povezanih s tumorom ovisnih o ctDNA bila 19,5%, a specifičnost 90%. .34 Osim toga, pacijenti koji su doživjeli vaskularnu invaziju imali su veću vjerojatnost da će imati mutacije ctDNA (P=0,041) i kraće preživljenje bez recidiva (P<0,001). Analiza funkcije mutantnog gena sugerira da su promjene u remodeliranju kromatina, Wnt/β-kateninu i JAK/STAT transdukciji signala, putu staničnog ciklusa P53, epigenetskim modifikatorima, putevima oksidativnog stresa, putu PI3K/AKT/MTOR i RAS/RAF/ Put MAPK kinaze igra ključnu ulogu u onkogenezi HCC-a.32,33 U studiji u kojoj su otkrivene mutacije povezane s tumorom, Huang i suradnici otkrili su da je učestalost mutacija povezanih s tumorom ovisnih o ctDNA bila 19,5%, a specifičnost 90%. .34 Osim toga, pacijenti koji su doživjeli vaskularnu invaziju imali su veću vjerojatnost da će imati mutacije ctDNA (P=0,041) i kraće preživljenje bez recidiva (P<0,001).Analiza funkcije mutantnog gena sugerira da promjene u remodeliranju kromatina, Wnt/β-kateninu i JAK/STAT signalizaciji, putu staničnog ciklusa P53, epigenetskim modifikatorima, putevima oksidativnog stresa, putu PI3K/AKT/MTOR i putu RAS/RAF/MAPK kinaze igraju ulogu kritičnu ulogu u tumorigenezi HCC-a.32,33 U studiji koja je otkrila mutacije povezane s tumorom, Huang et al.otkrili da je učestalost mutacija povezanih s tumorom ovisnih o ctDNA 19,5%, a specifičnost 90%..34 Osim toga, kod pacijenata sa susudnom invazijom često su se pojavile mutacije cDNK (P=0,041) i više kratka bezrecidivna aktivnost (P<0,001). .34 Osim toga, pacijenti s vaskularnom invazijom imali su više cDNA mutacija (P=0,041) i kraće preživljenje bez bolesti (P<0,001).Funkcionalna analiza mutantnih gena otkrila je remodeliranje kromatina, Wnt/β-katenin i JAK/STAT signalizaciju, put staničnog ciklusa P53, epigenetske modifikatore, put oksidativnog stresa, put PI3K/AKT/MTOR i RAS/RAF/MAPK Kinazni put igra ključnu ulogu u onkogenezi HCC-a. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中，Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%，特异性为90% .34 此外，经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 32.33 在 一 项 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， ， Huang 等 发现 肿瘤 突变 突变 依赖于 依赖于 ctdna 的 为 为 19,5% ， 特异性 为 为 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 突变 （（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（（特异性 为 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 特异性 为 为 为 90%.短的无复发生存期（P<0,001）。32,33 U studiji koja je otkrila mutacije povezane s tumorom, Huang et al.otkrili su da su mutacije povezane s tumorom 19,5% ovisne o cDNA sa specifičnošću od 90% 34. Osim toga, pacijenti koji su bili podvrgnuti vaskularnoj invaziji imali su veću vjerojatnost da će razviti cDNA.mutacija (P = 0,041) i kratka bezrecidivna učinkovitost (P <0,001). mutacija (P=0,041) i kraće preživljenje bez bolesti (P<0,001).Još jedan uobičajeni gen pokretač HCC-a je TP53, koji ima stopu mutacije od preko 30%.Istraživanja su pokazala da se učestalost mutacija TP53 u ctDNA u krvi i urinu kreće od 5% do 60%.35 Johanova studija pokazala je da spektar mutacija ctDNA u kasnom HCC-u ima sličnu stopu mutacije kao rani HCC, uključujući TERT promotor (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutacije u AXIN1 ., ARID2, KMT2D i TSC2 (po 6%).36 Onkogen β-katenin (CTNNB1) igra važnu ulogu u Wnt signalnom putu.Koaktivator transkripcije CTNNB1 može pospješiti ekspresiju gena, što može dovesti do stanične proliferacije, inhibicije apoptoze i angiogeneze.CTNNB1 također može djelovati s TERT-om kako bi inducirao transformaciju hepatocita.33 Promotor TERT je često mutiran u nekim solidnim tumorima.Promjene u TERT-u, jednoj od najranijih genetskih promjena u malignoj transformaciji HCC-a, mogu dovesti do reaktivacije telomeraze u ciroznim hepatocitima i mogu pospješiti proliferaciju i spriječiti starenje.Zabilježeno je da se mutacije u 33-37 TERT promotoru pojavljuju u 59-90% bolesnika s proliferativnim jetrenim čvorovima i ranim HCC-om i povezane su s preživljenjem.38
Promjene broja kopija (CNA) važna su podvrsta somatskih mutacija.Istraživanje je pokazalo da je rašireno i žarišno opterećenje CNA genomski potpis koji može predvidjeti imunološku infiltraciju tumora i isključenje kod nekih vrsta raka.39 Signalizacija aktivne infiltracije, visoka citolitička aktivnost, teška upala i genetski markeri povezani s prezentacijom antigena u HCC-u.Analiza niza podataka o polimorfizmima jednog nukleotida u 477 ispitanika pokazala je nisko opterećenje SŽS-a.Nasuprot tome, kromosomski nestabilni tumori s velikim opsežnim CNA opterećenjem pokazali su znakove imunološkog odbacivanja i bili su povezani s proliferacijom, popravkom DNA i disfunkcijom TP53.Xu i sur.pokazalo je da je skupina s HCC-om imala više rezultate CNA od skupine s kroničnom bolešću jetre.40 Korištenjem sekvencioniranja cijelog genoma jedne stanice, otkriveno je da se CNA pojavljuju rano u hepatokarcinogenezi i ostaju relativno stabilni tijekom progresije tumora.41 Chung et al.otkrili su da su razine cfDNA značajno povišene u bolesnika s HCC-om i da su CNA u cfDNA na cijelom genomu važan neovisni prognostički marker u bolesnika s HCC-om liječenih sorafenibom.42 Pacijenti s većim CNA opterećenjem imali su veću vjerojatnost da će imati progresiju bolesti i smrt nego oni s nižim CNA opterećenjem.Ollerich i sur.otkrili su da se indeks nestabilnosti broja kopija (CNI) može koristiti za procjenu CNA u cfDNA pacijenata oboljelih od raka.Primijetili su da pacijenti s uznapredovalim rakom imaju značajno više CNI rezultate od kontrolne skupine, koja procjenjuje odgovor bolesnika na sustavnu kemoterapiju i imunoterapiju.43 Ovi rezultati sugeriraju da CNA pronađeni u tekućim uzorcima biopsije mogu poslužiti kao prognostički pokazatelji kod pacijenata s uznapredovalim rakom.HCC na pozadini sustavne terapije.
Trenutno se metode koje se koriste za otkrivanje ctDNA mogu podijeliti na ciljane i neciljane metode.Ukratko, ciljane metode kao što su digitalna lančana reakcija polimerazom (dPCR), BEAMing digitalni PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq i Tam-Seq vrlo su osjetljive na unaprijed definirane gene.Neciljane metode kao što su sekvenciranje cijelog genoma i NGS pružaju sveobuhvatan pogled na cijeli genomski krajolik.44 U usporedbi s ciljnim pločama, sekvenciranje cijelog genoma može otkriti ne samo točkaste mutacije i umetanja, već i preraspodjele i varijacije broja kopija.prognozu, a CTC i cfDNA dobri su pokazatelji koji se mogu koristiti za dinamičko praćenje HCC-a.45 Osim toga, analiza cfDNA može biti korisnija u otkrivanju HCC-a.Yan i sur.pokazalo je da je cfDNA u plazmi bolesnika s HCC-om značajno viša nego u bolesnika s fibrozom jetre i zdravih kontrolnih osoba.U usporedbi s AFP-om, očekuje se da će ctDNA biti bolji marker probira za rani HCC.46 U prospektivnoj studiji 47 tekućih biopsija koja je testirala cfDNA i proteine u populaciji populacije, pokazalo se da su učinkoviti u razlikovanju pacijenata s HCC-om od pacijenata bez HCC-a.U praćenju 331 ultrazvučnog normalnog i AFP-negativnog pacijenta, osjetljivost i specifičnost cfDNA za dijagnosticiranje HCC-a bile su 100%, odnosno 94%, tako da je cDNA mogla otkriti HCC u asimptomatskih HBsAg seropozitivnih osoba.U studiji Yeo48 utvrđena je visoka učestalost (92,5%) hipermetilacije promotora RASSF1A u bolesnika s HCC-om.Osim toga, Xu et al.stvorili su dijagnostički model za predviđanje HCC-a korištenjem panela specifičnih markera metilacije sa specifičnošću i osjetljivošću od 90,5% odnosno 83,3%.Panel omogućuje razlikovanje bolesnika s HCC-om od bolesnika s drugim bolestima jetre, što je bolje od AFP-a.Također su otkrili da normalne kontrolne osobe koje su bile pozitivne mogu imati čimbenike rizika za HCC, kao što je HBV infekcija ili povijest konzumacije alkohola.25 Pretpostavljamo da čimbenici visokog rizika za HCC mogu pospješiti hipermetilaciju cfDNA, koja zatim pridonosi progresiji HCC-a, te stoga cfDNA može igrati ključnu ulogu u probiru visokorizičnih skupina.Cai i sur.sažeti cijeli niz mutacija ctDNA i ponuditi robusnu strategiju za procjenu tumorskog opterećenja pacijenata.49 Ova strategija može identificirati tumorigenezu medijan od 4,6 mjeseci prije promjene slike i pokazala je superiornu dijagnostičku učinkovitost u usporedbi sa serumskim biomarkerima AFP, AFP-L3 i PIVKA-II.Dijagnostička vrijednost cDNA testiranja je dokazana kada procjena slike nije dostupna, tako da je cDNA testiranje vrijedno u dijagnozi ranog HCC-a u visokorizičnim skupinama.Nedavno su znanstvenici koristili NGS tehnologiju za analizu pokazatelja multivarijatne genetske varijacije (uključujući 5-hidroksimetilcitozin, 5′-motiv, fragmentaciju, trag nukleosoma, HIFI) u 3204 klinička uzorka i cfDNA.50 Re-validiranih HIFI modela s tri nezavisna niza, testa i testnih skupova pokazalo je stabilnu i pouzdanu diskriminaciju između HCC i ne-HCC populacija s 95,79% odnosno 95,42% osjetljivosti u HCC-specifičnom testu i test setovima.Spolovi su bili 95,00% odnosno 97,83%.Dijagnostička vrijednost HIFI metode veća je od AFP-a u razlikovanju HCC-a od ciroze.Osim toga, ctDNA se također koristi u kirurškom liječenju.Atsushi i sur.odredili su prijeoperativne razine ctDNA u serumu u bolesnika s HCC-om i otkrili da su stopa recidiva i stopa ekstrahepatičnih metastaza u cDNA pozitivnoj skupini bili značajno viši nego u cDNA negativnoj skupini, a razine cDNA bile su značajno povezane.s progresijom tumora.51 Budući da je vrlo osjetljiv biomarker, ctDNA može predvidjeti sposobnost HCC-a da napadne krvne žile.Wang i sur.proveli su sekvencioniranje cijelog genoma 46 bolesnika s HCC-om, a multivarijantnom analizom utvrđeno je da je granična vrijednost učestalosti alela varijante cDNA za invaziju u mikrožile 0,83%, osjetljivost 89,7% i specifičnost 80,0%.neovisni čimbenik rizika za mikrovaskularnu invaziju kod resektabilnog HCC-a, što sugerira da cDNA može pomoći u vođenju optimalnog liječenja.Zaključno, ctDNA je u potpunosti uključena u pojavu i razvoj HCC-a i može se koristiti za rani probir, kiruršku procjenu i praćenje bolesti.
CTC su maligne stanice nastale iz primarnih tumora ili metastaza koje metastaziraju u krvotok.Tumorske stanice luče matrične metaloproteinaze (MMP), koje razgrađuju bazalnu membranu, omogućujući tumorskim stanicama izravan ulazak u krvne i limfne žile.Međutim, većina CTC-a se brzo eliminira anoikisom, imunološkim napadom ili stresom na smicanje.53 Epitelno-mezenhimalni prijelaz (EMT) omogućuje CTC-ima da se lako izoliraju iz primarnog tumorskog tkiva, napadnu kapilare i postignu značajno poboljšano preživljavanje, metastaze, invazivnost i otpornost na lijekove.Studije su pokazale da postoji duboka heterogenost među različitim tumorskim stanicama u primarnim metastatskim tumorima.Stoga CTC analiza može dovesti do sveobuhvatnog razumijevanja heterogenosti tumorskih stanica.54
Specifični markeri za CTC-ove povezane s HCC-om uključuju glipikan-3 (GPC3), asialoglikoproteinski receptor (ASGPR), molekulu adhezije epitelnih stanica (EpCAM) i markere povezane s matičnim stanicama kao što su CD44, CD90, 55 i međustanična adhezijska molekula 1 (ICAM1).) .56 GPC3 marker je protein usidren u staničnu membranu koji se klinički koristi za patološku analizu i karakterizaciju HCC-a.57 Ekspresija GPC3 je češća u tumorskim stanicama HCC sa srednjom i niskom diferencijacijom i potiče ekstrahepatičku migraciju;osim toga, prisutnost GPC3+ CTC ukazuje na metastatski HCC.58 ASGPR je transmembranski protein koji se eksprimira samo na površini hepatocita i jako je eksprimiran u dobro diferenciranom HCC-u.EpCAM je jedan od najčešće korištenih proteina povezanih s membranom za hvatanje CTC-a.EpCAM je identificiran kao površinski marker stanica HCC-a s karakteristikama matičnih stanica,59 što je u korelaciji s različitim kliničko-patološkim značajkama HCC-a, kao što su vaskularna invazija, procijenjene razine AFP-a i uznapredovali stadij raka jetre u bolnici u Barceloni (BCLC).Fenotip 60 CTC EMT je visoko metastatski.54 EMT procesa u CTC-u potiču metastaze HCC-a.Ekspresija EMT markera kao što su vimentin, twist, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, puž, puž i E-kadherin proučavana je u CTC-ima dobivenim iz jetre pacijenata s HCC-om.58 Sustav CanPatrol™ koji je razvio Cheng [61] klasificirao je CTC u tri fenotipske podskupine na temelju pretežno izraženih markera: epitelni fenotip (EpCAM, CK8/18/19), mezenhimalni fenotip (vimentin, spiralni) i miješani fenotip.U 176 bolesnika ukupni CTC bio je bolji od AFP-a u razlikovanju HCC-a od benigne bolesti jetre.Vrijednosti AUC za ukupni CTC, AFP i kombinirani ukupni CTC i AFP bile su 0,774 (95% CI, 0,704-0,834), 0,669 (95% CI, 0,587-0,750) i 0,821 (95% CI, 0,756-0,886 ).), odnosno.CTC klasifikacija temeljena na EMT može predvidjeti dijagnozu HCC-a, rani recidiv, metastaze i kraće ukupno vrijeme.
Trenutno metode za otkrivanje CSC-a uključuju fizičke metode i biološke metode.Fizičke metode, koje se često nazivaju obogaćivanjem na temelju biofizičkih svojstava, uglavnom ovise o fizičkim svojstvima CSC-a, kao što su veličina, gustoća, naboj, pokretljivost i sposobnost deformiranja.Ovisno o fizičkim svojstvima, postoje različite metode kao što su sustavi koji se temelje na filtraciji, dielektroforeza, itd. Potonje, također poznato kao obogaćivanje temeljeno na imunoafinitetu, uglavnom se temelji na vezivanju antigen-antitijelo budući da metoda koristi antitijela protiv biomarkera specifičnih za tumor kao što su EpCAM, ASGPR, receptor ljudskog epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), specifični antigen prostate (PSA), ljudski pancitokeratin (P-CK) i karbamoil fosfat sintaza 1 (CPS1).62 Druga vrsta, nazvana metoda bez obogaćivanja, koristi protočnu citometriju za razlikovanje CTC-a od leukocita na temelju većeg omjera jezgre i citoplazme i veličine.Trenutno je jedini test za otkrivanje CTC-a koji je odobrila FDA sustav Cell-Search™, koji koristi EpCAM marker stanične površine. Međutim, kombinirana detekcija CTC-a temeljena na markerima mogla bi povećati stopu pozitivnosti.54 Mješavina protutijela protiv ASGPR-a i CPS1 postigla je stopu otkrivanja CTC-a od 91% u bolesnika s HCC-om.63 Zhang i suradnici koristili su CTC-čip s protutijelima protiv ASGPR-a, P -CK i CPS1, i razlikovali su pacijente s HCC-om od onih s benignom bolešću jetre ili rakom bez HCC-a po stopi od 100%.64 Studija koju je proveo Wang otkrila je EpCAM+ CTC-ove u 60% od 42 bolesnika s HCC-om i pronašla značajne korelacije između pozitivnosti stopa i broj CTC-ova s TNM stadijem.65 Guo i suradnici otkrili su da je PCR rezultat izveden iz CTC-a bio povišen u 125/171 (73%) pacijenata čija je razina AFP bila <20 ng/mL s osjetljivošću od 72,5% i specifičnost od 95,0%, u usporedbi s 57,0% i 90,0% za AFP na granici od 20 ng/mL.66 Kombinacija AFP-a i CTC-a može poboljšati otkrivanje HCC-a.45 Vjeruje se da CTC-i imaju prednost u odnosu na AFP u ranom probiru skupina s visokim rizikom za HCC. Međutim, kombinirana detekcija CTC-a temeljena na markerima mogla bi povećati stopu pozitivnosti.54 Mješavina protutijela protiv ASGPR-a i CPS1 postigla je stopu otkrivanja CTC-a od 91% u bolesnika s HCC-om.63 Zhang i suradnici koristili su CTC-čip s protutijelima protiv ASGPR-a, P -CK i CPS1, i razlikovali su pacijente s HCC-om od onih s benignom bolešću jetre ili rakom bez HCC-a po stopi od 100%.64 Studija koju je proveo Wang otkrila je EpCAM+ CTC-ove u 60% od 42 bolesnika s HCC-om i pronašla značajne korelacije između pozitivnosti stopa i broj CTC-ova s TNM stadijem.65 Guo i suradnici otkrili su da je PCR rezultat izveden iz CTC-a bio povišen u 125/171 (73%) pacijenata čija je razina AFP bila <20 ng/mL s osjetljivošću od 72,5% i specifičnost od 95,0%, u usporedbi s 57,0% i 90,0% za AFP na granici od 20 ng/mL.66 Kombinacija AFP-a i CTC-a može poboljšati otkrivanje HCC-a.45 Vjeruje se da CTC-i imaju prednost u odnosu na AFP u ranom probiru skupina s visokim rizikom za HCC.Međutim, kombinirano otkrivanje CTC-a na temelju markera može povećati postotak pozitivnih rezultata.54 Mješavina anti-ASGPR i CPS1 protutijela postigla je stopu otkrivanja CTC-a od 91% u bolesnika s HCC-om.63 Zhang et al.koristio je CTC-čip s antitijelima protiv ASGPR, P-CK i CPS1, a također je razlikovao pacijente s HCC-om od onih s benignom bolešću jetre ili bez HCC-a u stopi od 100%.učestalost i broj COK prema stadiju TNM.65 Guo i suradnici su otkrili da je pokazatelj PCR, dobiven iz COK, bio povećan kod 125/171 (73%) pacijenata, kod kojih je razina AFP bila <20 ng/ml s osjetljivošću 72,5% i specifičnost 95,0% u usporedbi s 57,0% i 90,0% za AFP na razini pora od 20 ng/ml.66 Kombinacija AFP i COK može poboljšati otkrivanje GCK.45 Smatra se da COK ima prednost u odnosu na AFP pri ranom skriningu grup. učestalost i broj CTC-ova s TNM stadijem.65 Guo i suradnici su otkrili da je PCR izveden iz CTC-ova bio povišen u 125/171 (73%) bolesnika koji su imali razine AFP <20 ng/mL s osjetljivošću od 72,5% i specifičnošću 95,0% u usporedbi s 57,0% i 90,0% za AFP na graničnoj razini od 20 ng/mL.66 Kombinacija AFP-a i CTC-a može poboljšati otkrivanje HCC-a.45 Smatra se da CTC-ovi imaju prednost u odnosu na AFP u ranom probiru skupine.s visokim rizikom od HCC-a.Međutim, kombinirana detekcija CTC-ova na temelju markera može povećati postotak pozitivnih rezultata.54 Mješavina anti-ASGPR i CPS1 protutijela postigla je stopu otkrivanja CTC-a od 91% u bolesnika s HCC-om.63 Zhang et al.koristili su CTC čipove s antitijelima protiv ASGPR, P-CK i CPS1 i razlikovali pacijente s HCC-om od benigne bolesti jetre i bez HCC-a sa 100%.64 Wangova studija identificirala je 60% EpCAM+ CTC-ova u 42 bolesnika s HCC-om i pronašla značajnu korelaciju između učestalosti i broja CTC-ova u TNM fazi. 65 Guo 等 人 发现 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， ， ， 的 的 PCR 评分 升高 ， 为 为 72,5%， 特异性 特异性 95,0%， 而 AFP 在 截止 截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 20NG/ml 时 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%。65 Guo i sur.otkrili da su kod 125/171 (73%) pacijenata s razinom AFP-a <20 ng/ml pokazatelji PCR-a, dobiveni pomoću COK-a, bili povećani s osjetljivošću 72,5% i specifičnošću 95,0%, u to vrijeme kao AFP na razini otsečki Specifičnost sastavljena od 20 ng/ml. utvrđeno je da su u 125/171 (73%) pacijenata s razinama AFP <20 ng/mL, PCR vrijednosti izvedene iz CTC-a bile povišene s osjetljivošću od 72,5% i specifičnošću od 95,0%, dok je AFP bio na graničnoj specifičnosti bio je 20 ng/mL.ml bio je 57,0% i 90,0%.66 Kombinacija ORP-a i CTC-a poboljšava otkrivanje HCC-a.45 Smatra se da su CTC superiorniji od AFP-a u ranom probiru visokorizičnih HCC populacija.Stoga, za CTC-pozitivne i visokorizične HCC skupine, CTC testiranje treba rutinski kombinirati s ultrazvukom i otkrivanjem AFP-a.Međutim, CTC se smatraju važnim prediktorima tumorskih metastaza i recidiva, a otkrivanje CTC se ne preporučuje samostalno kao dijagnostički alat.62 Stoga, CTC može poslužiti kao bolji prediktivni biomarker od drugih trenutno korištenih markera. Zhou i suradnici otkrili su da pacijenti s povišenim brojem EpCAM+ CTC-ova i regulatornih T-stanica pokazuju veći rizik od razvoja recidiva HCC-a od onih s niskim brojem CTC-a, s omjerom recidiva od 66,7% naspram 10,3% (P <0,001).67 Sličnu studiju izvijestili su Zhong i sur.68 Osim toga, Qi je otkrio da je 101 od 112 pacijenata (90,81%) s HCC-om, uključujući one s ranim stadijem bolesti, bilo pozitivno na CTC-ove i da su vrlo mali HCC-noduli otkriveni nakon 3 do 5 mjeseci praćenja. Zhou i suradnici otkrili su da pacijenti s povišenim brojem EpCAM+ CTC-ova i regulatornih T-stanica pokazuju veći rizik od razvoja recidiva HCC-a nego oni s niskim brojem CTC-a, s omjerom recidiva od 66,7% naspram 10,3% (P <0,001).67 A sličnu studiju izvijestili su Zhong i sur.68 Osim toga, Qi je otkrio da je 101 od 112 pacijenata (90,81%) s HCC-om, uključujući one s ranim stadijem bolesti, bio pozitivan na CTC-ove i da su vrlo mali HCC-noduli otkriveni nakon 3 do 5 mjeseci praćenja. Čžou i dr.otkrili da je kod pacijenata s povišenim brojem COK EpCAM+ i regulacijskim T-kletinama rizik od razvoja recidiva GCK bio veći nego kod pacijenata s niskim brojem COK, s koeficijentom recidiva 66,7% protiv 10,3% (P <0,001)67. Zhou i suradnici otkrili su da pacijenti s povišenim EpCAM+ CTC-ovima i regulatornim T-stanicama imaju veći rizik od recidiva HCC-a nego oni s niskim CTC-om, sa stopom recidiva od 66,7% naspram 10,3% (P<0,001)67.Sličnu studiju proveli su Zhong i sur.68. Osim toga, Qi je otkrio da je 101 od 112 pacijenata (90,81%) s HCC-om, uključujući one s ranom bolešću, imalo CTC-ove, te da su vrlo mali HCC čvorići otkriveni nakon 3 do 5 mjeseci praćenja. Zhou 等 人 发现 ， ， 与 与 与 与 与 较 较 少 的 患者 相比 ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， ， epcam+ ctc 和 调节性 t 细胞 数量 升高 患者 发生 发生 发生 hcc 复发 的 更 ， 复发率 分别 为 66,7% 和 10,3% (p <0,001)。 人 人 发现 与 与 与 与 与 与 少 的 的 患者 相比 ， ， ， ， ， ， ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 ， ， ， 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率 复发率p <0,001)............. Čžou i dr.otkrili da su pacijenti s povećanim brojem COK EpCAM+ i regulacijskim T-kletinama imali veći rizik od recidiva GCK u usporedbi s pacijentima s manjim brojem COK, s čestim recidivima 66,7% odnosno 10,3% (P <0,001). Zhou i sur.otkrili su da pacijenti s povišenim EpCAM+ CTC-ovima i regulatornim T stanicama imaju veći rizik od recidiva HCC-a u usporedbi s pacijentima s manjim brojem CTC-ova, sa stopama recidiva od 66,7% odnosno 10,3% (P <0,001).Sličnu studiju izvijestili su Zhong i sur.68 Osim toga, Qi je otkrio da je 101 od 112 pacijenata s HCC-om (90,81%), uključujući pacijente s ranom bolešću, imalo pozitivne rezultate CTC-a i nakon 3 posjeta pronašli su vrlo male čvorove HCC-a.Promatranje do 5 mjeseci.Također su pronašli CTC kod 12 pacijenata s kroničnom HBV infekcijom i pronašli male HCC tumore unutar 5 mjeseci kod 2 CTC pozitivna pacijenta.69 Dakle, CTC se mogu koristiti za predviđanje HCC-a, 70 ali se mogu koristiti više rutinski kao prediktivni biomarkeri.
Poput cfDNA, cfRNA se oslobađa u krvotok kroz različite sustave.Ove molekule u perifernoj krvi predstavljaju kancerogeno tkivo porijekla.U usporedbi s markerima otkrivenim neinvazivnim metodama, cfRNA su dinamičnije regulirane, tkivno specifične i obilne su u izvanstaničnom okruženju.Značaj i dijagnostička vrijednost 71 miRNA (miRNA) u HCC-u prikazana je u mnogim studijama.miRNA su endogene nekodirajuće RNA (ncRNA) koje reguliraju različite molekularne biološke aktivnosti inhibicijom translacije ciljnih glasničkih RNA (mRNA).miRNA se nalaze u apoptotičnim tijelima inkapsuliranim u egzosome, ali se također mogu stabilno vezati za serumske proteine i lipide u perifernoj krvi i mogu se koristiti za procjenu HCC-a.mikroRNA su uključene u regeneraciju jetre, metabolizam lipida, apoptozu, upalu i razvoj HCC-a.72 Onkogene miRNA kao što su miR-21, miR-155 i miR-221 dobro su poznate u HCC-u.Konkretno, miR-21 igra ključnu ulogu u sintezi kolagena u izvanstaničnom matriksu i fibrozi te potiče hepatokarcinogenezu aktiviranjem hematopoetskih matičnih stanica.72,73 MiRNA supresora tumora u HCC-u uključuju miRNA-122, miRNA-29, obitelj Let-7 i obitelj miRNA-15.Obitelj Let-7 sastoji se od mnogih tumor supresorskih miRNA koje ciljaju obitelj RAS.Obitelj miR-15 uključuje miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 i miR-497, koji imaju komplementarne sekvence za određene mRNA.Osim toga, duge nekodirajuće RNA (lncRNA) i kružne RNA (cirRNA) također su važne za rani probir HCC-a.lncRNA predstavljaju najširu klasu ncRNA, uključujući ncRNA slične mRNA, i uključene su u patogenezu mnogih ljudskih bolesti.LncRNA igraju regulatornu ulogu u jetrenom mikrookruženju i kroničnoj bolesti jetre.74 CircRNA su također klasa ncRNA s više funkcija u regulaciji ekspresije gena.Nedavno se circRNA smatraju dijagnostičkim alatima za HCC.
Cirkulirajuća slobodna RNA ima izvanrednu stabilnost, uključujući otpornost na temperaturu, pH i RNase, što čini izolaciju fnRNA iz periferne krvi manje zamornom korištenjem standardnih metoda pročišćavanja RNA.Najčešće korištene metode uključuju NGS, microarray i RT-qPCR.NGS omogućuje mjerenje mikroRNA u cijelom genomu.Međutim, ova metoda je skupa i analiza nije standardizirana.Nasuprot tome, RT-qPCR je jeftin, brzo umnožava nukleinske kiseline i nudi mnoge prednosti kao što su veća osjetljivost, veća točnost, širi dinamički raspon i zahtijeva manje uzoraka.Mikronizovi su još jedna metoda koja se koristi za otkrivanje miRNA na temelju osjetljive i specifične hibridizacije ciljnih miRNA s komplementarnim DNK probama, 75 ali analiza podataka mikronizova oduzima puno vremena.
Prijavljeno je da su cirkulirajući miR-122 i Let-7 potencijalno korisni u dijagnosticiranju ranog stadija HCC-a u visokorizičnim skupinama, markera u bolesnika s premalignim čvorovima povezanim s HBV-om i ranog stadija HCC-a.76 Cai i sur.otkrili da članovi obitelji Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 i miR-199a/b) imaju rizik od kroničnih HCC u bolesnika s hepatitisom.Obitelj Let-7 može poslužiti kao učinkovit surogat biomarker za predviđanje razvoja HCC-a u visokorizičnim skupinama povezanim s kroničnim hepatitisom C. 77 miR-122 ima visoku dijagnostičku točnost u otkrivanju ranog HCC-a u bolesnika s cirozom jetre.78 MiR-107 koji cirkulira u serumu također je procijenjen u ranim stadijima HCC-a, 79 i pokazao je dobar potencijal u visokorizičnim populacijama.Zhou i suradnici izvijestili su da panel miRNA (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a i miR-801) može razlikovati HCC od kroničnog hepatitisa B (CHB) i ciroze osjetljivost je bila 79,1% i 75%, a specifičnost 76,4% odnosno 91,1%.80 Kod HCC-a povezanog s HBV-om, otkrili smo da su razine miR150 značajno smanjene u usporedbi s onima u kroničnih HBV bolesnika bez HCC-a (osjetljivost 79,1%, specifičnost 76,5%).-224 bio je povišen u HCC-u u usporedbi sa zdravim kontrolama, a analize podskupina pokazale su više razine u bolesnika s HCC-om povezanim s HBV-om.pacijenti s cirozom povezanom s hepatitisom B i HCC identificirali su klasifikator siRNA koji sadrži sedam različito izraženih siRNA koje mogu otkriti HCC u različitim kontrolama;Raspon AUC kod ranog probira bolji je od AFP dobrovoljaca.Otkrili su da četiri miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p i miR-365a-3p) mogu razlikovati pacijente s HCC-om od pacijenata bez HCC-a.Pet miRNA s prekomjernom ekspresijom (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p i miR-148a-3p) smatraju se potencijalnim HBV infekcijama u biomarkerima HCC-a, ciroze i CHB-a, posebno miR-34a-5p mogu biti biomarkeri za cirozu jetre,85 i mogu biti potencijalni biomarkeri za rani probir HCC-a u visokorizičnim populacijama.Najviše proučavana lncRNA u HCC-u visoko je aktivirana kod raka jetre (HULC).Druge studije su pokazale da se HULC koji cirkulira u bolesnika s HCC-om može koristiti kao dijagnostički marker jer je ova lncRNA visoko regulirana u bolesnika s HCC-om u usporedbi sa zdravim pojedincima.71,86 Među ostalim lnRNA, LINC00152 se smatra najboljom dijagnostičkom lncRNA zbog svoje visoke AUC, osjetljivosti i specifičnosti.86 U jednoj studiji, ekspresija LINC00152 u perifernoj krvi postupno je rasla od normalnih zdravih kontrola do pacijenata s CHB i cirozom, i konačno je bila najveća kod HCC-a.Studije ekspresije circSMARCA5 u plazmi pacijenata s HCC-om pokazale su progresivno opadanje ekspresije kod HCC-a u rasponu od hepatitisa do ciroze i prekanceroznih lezija.87 Analiza ROC krivulja potvrdila je potencijal ovih circRNA u razlikovanju pacijenata s hepatitisom ili cirozom jetre od onih s HCC-om, posebno onih s razinama AFP ispod 200 ng/mL.Osim toga, Zhu je analizirao 13 617 cikličkih RNA u uzorcima plazme pacijenata s HCC-om povezanih s HBV-om i potvrdio da je 6 cikličkih RNA različito izraženo u HCC-u i cirozi povezanoj s HBV-om, što sugerira da cRNA mogu biti korisne.markeri za rani probir visokorizičnih skupina kao što su oni povezani s bolestima jetre, pacijenti sa sklerozom.88
Egzosomi su membranski vezikuli promjera 40-160 nm;više intracelularnih vezikula stapaju se sa staničnom membranom i otpuštaju u izvanstanični matriks.Sadrže mnogo aktivnih komponenti, uključujući lipide, proteine, RNA i DNA, i igraju ključnu ulogu u komunikaciji između stanica, kako HCC tako i ne-HCC stanica.89,90 Egzosomi reguliraju napredovanje HCC-a aktiviranjem fibroblasta hepatocita i zvjezdastih stanica, imunoloških stanica, normalnih hepatocita i HCC stanica.91 U mikrookruženju tumora, tumorske stanice proizvode veliki broj egzosoma koji se prenose iz stanica raka u nezrele stanice, koje su pak uključene u onkogenezu, razgradnju i staničnu signalizaciju.92 Istraživanja su pokazala da egzosomi mogu prenijeti onkogene u normalne stanice tijekom patoloških procesa, što može biti jedan od mehanizama invazije tumora i metastaziranja.93 Uloga egzosoma u napredovanju raka može biti dinamična i specifična za vrstu raka, 89 Egzosome mogu internalizirati susjedne ili udaljene stanice kako bi regulirali više ciljnih gena u stanicama primateljima koji mogu biti uključeni u međustaničnu komunikaciju iona i interakcije stanične mikrookruženja, mogu posreduju u staničnoj signalizaciji i metabolizmu.94 Karakteristike i dinamičke promjene egzosomskih kargo molekula izravno odražavaju karakteristike i dinamičke promjene roditeljskih tumorskih stanica,95 što je ujedno i osnova za korištenje egzosoma u dijagnostici i prognozi raka, kao i za predviđanje individualnog odgovora na terapiju protiv raka. ..96
Tradicionalne laboratorijske metode za izolaciju i analizu egzosoma su složene, u više koraka i dugotrajne, uključujući ultracentrifugiranje, filtraciju, kromatografiju isključenja veličine, imunoafinitetno pročišćavanje, Western blotting, enzimski imunoanalizu (ELISA), PCR i analizu protoka.minijaturizirani sustavi i platforme lab-on-a-chip koje koriste mikro/nanotehnologiju uvelike se razvijaju za brzu, praktičnu in situ izolaciju egzosoma.Analiza praćenja nanočestica (NTA) široko je korištena metoda za karakterizaciju veličine i koncentracije egzosoma, uključujući metode kao što su magnetske nanočestice i polihidroksialkanoati.Mikrofluidne i elektrokemijske metode također mogu brzo otkriti egzosome u visokim prinosima.
Egzosomalni proteini su važni markeri za dijagnozu HCC-a.U studiji Arbelaiz, razina 98 RasGAP SH3 veznog proteina (G3BP) i polimernog imunoglobulinskog receptora (PIGR) bila je značajno povišena u egzosomima izvedenim iz HCC-a, a navodna kombinirana učinkovitost dvaju proteina bila je bolja od one AFP-a.Preopterećenje željezom važan je čimbenik koji pridonosi razvoju HCC-a.Tseng je izvijestio da hepcidin može igrati ključnu ulogu u otpornosti na HCC.99 Egzosomi izvedeni iz seruma pacijenata s HCC-om imali su značajno veći broj kopija varijanti mRNA hepcidina nego njihovi zdravi uzorci, što sugerira da bi hepcidin mogao biti novi dijagnostički biomarker za HCC.Protein 14-3-3ζ u egzosomima proizveden od strane 100 HCC može smanjiti aktivaciju, proliferaciju i diferencijaciju T stanica i može inducirati transformaciju T stanica u regulatorne T stanice, što rezultira deplecijom T stanica.101 To podupire nekoliko studija koje istražuju izbjegavanje tumora od imunološkog nadzora, 102 što može pridonijeti nastanku HCC tumora.
Uz prisutnost ecRNA u plazmi ili serumu, egzosomi obogaćeni RNA mogu se koristiti za neinvazivno određivanje stadija u stvarnom vremenu u ranom probiru tumora i za određivanje evolucije tumora i odgovora na terapiju.Razina egzosomalne miRNA-21 u krvnom serumu u skupini s HCC bila je 2,21 puta viša nego u skupini s CHB, au skupini s HCC 5,57 puta viša nego u zdravoj populaciji.U studiji Wang, egzosomi su značajno povećali HCC u usporedbi s pacijentima s cirozom s AUC vrijednostima od 0,83 (95% CI 0,74–0,93) i 0,94 (95% CI 0,88–1,00).104 Dobiveni podaci razjasnili su uključenost specifičnih egzosomalnih kargo molekula u regulaciju onkogeneze i progresije HCC-a.105 Serumska ekspresija miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 i miR-26a je dosljedna.i metastazama, a razine miR21 bile su puno više u bolesnika s HCC-om nego u zdravih kontrolnih osoba, a također i u bolesnika s CHB-om.102 LncRNA je imala potencijalnu dijagnostičku vrijednost u HCC-u.Studije su pokazale da egzosomi izvedeni iz seruma bolesnika s HCC-om imaju znatno više razine LINC00161, LINC000635 i lncRNA aktiviranih transformirajućim faktorom rasta-β nego u bolesnika bez HCC-a, a te su lncRNA snažno povezane s TNM stadijem i volumenom tumora.110 Conigliaro et al.Utvrđeno je da egzosomi CD90+ izražavaju visoke razine lncRNAH19, što je značajno povećalo otpuštanje faktora rasta vaskularnog endotela (VEGF) i proizvodnju receptora VEGF-R1, čime se stimulira angiogeneza.93 CircRNA su još jedna vrsta egzosomalnih ncRNA – izražene na nižim, ali stabilnim razinama među vrstama, circRNA također pokazuju specifičnost za tip stanice, tip tkiva, razvojni stupanj i regulatornu aktivnost.111 circRNA su dijagnostički biomarkeri za rani i minimalno invazivni rak.112 Nedavna klinička ispitivanja pokazala su da specifičnost pojedinačnih miRNA u predviđanju HCC-a nije idealna.Stoga složeno otkrivanje korištenjem višestrukih testova (npr. miR-122 i miR-48a u kombinaciji s AFP-om) može poboljšati identifikaciju ranog HCC-a i diferencijaciju HCC-a od ciroze.100
Bolesnici s CHB i cirozom jetre najčešća su visokorizična skupina za razvoj HCC-a.Za visokorizične skupine, nakon što se postigne trajni virološki odgovor, treba razviti isplativu strategiju nadzora temeljenu na riziku od HCC-a, a rani probir je ključ za poboljšanje dijagnoze i liječenja HCC-a s visokim omjerom troškovne učinkovitosti2 ..Metode ranog probira za rak imaju mnoga ograničenja: nisu razvijene učinkovite metode ranog probira za većinu vrsta raka, a pridržavanje je obično slabo.U usporedbi s tradicionalnim ranim metodama probira, tehnologija tekuće biopsije ima očite prednosti: jednostavnost uzorkovanja, otkrivanje panraca, dobru ponovljivost uzorka i učinkovit odgovor na heterogenost tumora.S obzirom na isplativost metoda povezanih s tekućom biopsijom, njihova uporaba u probiru HCC-a nije rutinski ispitana.Unatoč napretku u preciznoj detekciji na molekularnoj razini, tekućinska biopsija je skupa za otkrivanje HCC-a u ciljanih pacijenata, ograničavajući njenu široku upotrebu u usporedbi sa specifičnim postupcima snimanja kao što su ultrazvuk i magnetska rezonancija.113,114 Međutim, prethodna studija pokazala je da je tekuća biopsija pokazala značajnu korist u smislu godina života prilagođenih kvaliteti (QALYs).115 Također su pokazane dobrobiti tekuće biopsije u ranom karcinomu želuca i nazofarinksa.116,117 Trenutno stajalište je da tekuća biopsija može nadopuniti serumske biomarkere i radiološki probir u otkrivanju i dijagnozi tumora.117 118
Prema aktualnoj literaturi, tehnologija tekućinske biopsije pokazala je znatno veću osjetljivost i specifičnost u ranom probiru visokorizičnih skupina za rak jetre.Bez obzira na vrstu tekućinske biopsije, ona može razlikovati HCC od visokorizičnih osoba bez HCC-a, što ukazuje na važnost ranog probira jer su razlike između visokorizičnih i zdravih osoba očite.ctDNA ima kratko vrijeme poluraspada i može se koristiti za otkrivanje HCC-a, tako da sve promjene u cDNA koja potječe iz tumora mogu dati konkretne dokaze progresije tumora u stvarnom vremenu, posebno za male tumore.Visoka razina ctDNA ukazuje na razvoj i širenje raka te je rani pokazatelj progresije i recidiva.Osim toga, na temelju rezultata ctDNA, pacijenti mogu dobiti individualizirani tretman i praćenje.119 Specifična mjesta metilacije mogu biti bolji marker od AFP-a za ranu identifikaciju HCC-a i cirotičnih nodula.U resektabilnim slučajevima HCC-a, visoke razine cDNA su indikativne za mikrovaskularnu invaziju i postoperativni recidiv i metastaze.Promjene u broju kopija povezane su s preživljenjem bolesnika s HCC-om.Može se pretpostaviti da procjena cDNA može biti uključena u cjelokupno liječenje HCC-a, a cDNA može poslužiti kao učinkovit pokazatelj terapijske modulacije.Markeri koji se temelje na specifičnim genetskim mutacijama u ctDNA prihvaćeni su u kliničkim smjernicama za predviđanje učinkovitosti i praćenje rezistencije na lijekove.ctDNA testiranje može biti najkorisniji alat tekuće biopsije za rani probir.CTC također igraju ključnu ulogu u ranom probiru visokorizičnih HCC skupina.Razni markeri CTC-a povezanih s HCC-om od posebne su važnosti u nastanku, razvoju i recidivu HCC-a.Kao membranski vezikuli, egzosomi sudjeluju u međustaničnoj komunikaciji, posebice u HCC stanicama.Cirkulirajuće mikroRNK stabilne su u krvi i stoga mogu biti korisnije za rani probir HCC-a.Postupno su otkriveni egzosomski proteini i egzosomi bogati RNA, te je potvrđena njihova prediktivna učinkovitost za HCC.Zanimljivo je da različite etiologije HCC-a također mogu biti povezane s različitim mutacijama, tako da možemo odabrati različite biomarkere za rani probir na temelju različitih etiologija HCC-a.120
Međutim, trenutne tehnike biopsije tekućine upitne su u smislu stabilnosti i ne mogu neovisno provesti rani probir ili praćenje HCC-a, ali još uvijek mogu nadopuniti individualni probir i dijagnozu.121 Kao oblik tekuće biopsije, otkrivanje i oslikavanje ctDNA, CTC, cfRNA i AFP ili PIVKA-II povezanih s egzosomima imaju obećavajuće primjene u ranoj dijagnozi i prognozi HCC-a.Međutim, točan mehanizam otpuštanja ctDNA u krv tek treba razjasniti.Otkrivanje osnovnih bioloških svojstava ctDNA može olakšati njezinu upotrebu kao markera.Mala količina ctDNA u cirkulaciji i strogi zahtjevi za rukovanje uzorcima izazov su za kliničku provedbu detekcije cDNA u HCC-u.Osim toga, genetske mutacije nemaju specifične značajke koje omogućuju točnu identifikaciju karcinogena.Budući da su višestruke genetske i somatske varijante također prisutne u normalnim tkivima, genetske mutacije identificirane biopsijom tekućine mogu biti od ograničene koristi u ranom probiru na HCC.122 Ograničenja dobro definiranih korisnih ciljeva gena i biomarkera koji pomažu u razlikovanju cDNA od netumorske DNA najvažnija su pitanja u korištenju cDNA.nedostatak korisnosti osjetljivih i specifičnih markera za detekciju CTC-a.Pronađene su samo održive stanice s metastatskim potencijalom, a optimalna kombinacija markera obogaćenih CSC-om nije bila jasna.Izolacija CTC-a za kulturu i procjena njihovih mutacijskih profila također je izazovan zadatak.Zbog problema s identifikacijom, izolacijom i pročišćavanjem egzosoma, specifični molekularni mehanizam još uvijek je nejasan, a prethodne studije o mehanizmu egzosoma i HCC-a nisu bile detaljne, te načinu na koji se miRNA, lncRNA i proteini razvrstavaju u egzosome , i nije jasno je li preuzimanje egzosoma poseban tip procesa.Korištenje egzosoma za dijagnostiku i liječenje HCC-a još je u pretkliničkom stadiju.Nedostatak standardizacije postupaka tekuće biopsije, poput vrste epruveta koje se koriste za prikupljanje krvi, volumena krvi, pohranjivanja i otkrivanja uzoraka, izolacije i obogaćivanja, može spriječiti njihovu upotrebu u rutinskoj kliničkoj praksi zbog razlika u praksi u medicinskim centrima.Učinkovitost tekuće biopsije u ranom probiru, dijagnozi, evaluaciji učinkovitosti i predviđanju HCC-a tek treba istražiti, posebno za skupine visokog rizika.Tehnologija tekuće biopsije ima veliki potencijal i očekuje se da će se široko koristiti u kliničkoj praksi raka jetre u bliskoj budućnosti.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL i sur.Globalna statistika raka 2020.: GLOBOCAN procjenjuje učestalost i smrtnost od 36 vrsta raka u 185 zemalja.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Sjedište zemaljskog zdravstvenog povjerenstva.Kriteriji za dijagnozu i liječenje primarnog karcinoma jetre (izdanje 2022.) [J].Časopis za kliničke bolesti jetre, 2022., 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Smjernice za dijagnostiku i liječenje hepatocelularnog karcinoma (izdanje 2019.).Rak jetre.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Smjernice kliničke prakse za hepatocelularni karcinom: Japansko društvo za bolesti jetre, 2017. (JSH-HCC 4. smjernice), ažuriranje iz 2019.Rezervoar bolesti jetre.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Tekuća biopsija u kroničnoj bolesti jetre.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Tekuća biopsija raka dojke: fokusirani pregled.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Nadzor hepatocelularnog karcinoma: trenutna najbolja praksa i budući smjerovi.Gastroenterologija.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Kliničke smjernice EASL-EORTC: liječenje hepatocelularnog karcinoma.J Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK i sur.Kombinirana analiza AFP i HCCR-1 kao korisnih seroloških markera u malom hepatocelularnom karcinomu: prospektivna kohortna studija.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Diferencijalna ekspresija mikroRNA-125b u plazmi u bolesti jetre povezanoj s virusom hepatitisa B i dijagnostički potencijal hepatocelularnog karcinoma izazvanog virusom hepatitisa B.Rezervoar bolesti jetre.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologija i značaj alfa-fetoproteina u hepatocelularnom karcinomu.Jetra int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Kliničke smjernice za liječenje hepatocelularnog karcinoma u azijsko-pacifičkoj regiji: ažuriranje za 2017.Međunarodna organizacija za bolesti jetre.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei i sur.Dijagnostička vrijednost seruma PIVKA-II sama ili u kombinaciji s AFP-om u kineskih bolesnika s hepatocelularnim karcinomom.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Biopsija humoralne tekućine ne-malih stanica raka pluća bez plazme: bliže tumoru!ćelija.2020; 9 (11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Tekuća biopsija: trenutni status i budući izgledi.Liječenje Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Biopsija raka temeljena na tekućini: multimodalni dijagnostički alat u kliničkoj onkologiji.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleinske kiseline u ljudskoj plazmi.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Napredno otkrivanje cirkulirajuće tumorske DNA analizom veličine fragmenata.Znanost prevodi medicinu.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Duljina DNK fragmenta cirkulirajućeg tumora.PLOS geni.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. DNK cirkulirajućeg tumora: biomarker koji obećava u biopsiji raka na bazi tekućine.ciljni tumor.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Detekcija cirkulirajuće DNA tumora u ranim i kasnim stadijima zloćudnih bolesti ljudi.Znanost prevodi medicinu.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Tekuća biopsija za mutacionu prediktivnu analizu solidnog raka: perspektiva patologa.J Biotehnologija.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Rano otkrivanje tumora probirom DNA cirkulirajuće plazme: pomama ili nada?Belgijsko kliničko pravo.2020.;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Učinak virusa hepatitisa i starenja na metilaciju DNA u ljudskoj hepatokarcinogenezi.Histopatologija.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647
Vrijeme objave: 23. rujna 2022
